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乙醇含量 葉綠素含量的測定
發布時間:2021-04-30 01:02瀏覽次數:

植物生理學實驗葉綠體色素含量的測定 ----分光光度法 摘要: 葉綠體色素溶液各組成成分在可見光譜中具有不同的特征吸收峰。因此乙醇含量,應用分光光度 計在某一特定波長下所測定的吸光度。葉綠體色素的提取常用丙酮和乙醇有機溶劑。葉綠體 色素 95 %乙醇提取液中葉綠素 及類胡蘿卜素分別在665nm 470nm波長下具有最大吸收峰汽油檢測儀,據此所測得的吸光度值代人不同的經驗公式(見結果計算),計算 出葉綠體色素乙醇提取液中葉綠素 的濃度及其葉綠素總濃度和類胡蘿卜素的總濃度,并依據所使用的單位植物組織(鮮重、干重或面積)甲醇檢測儀,求算出色素的含量。 實驗原理與實驗目的實驗原理: 利用95%乙醇提取葉綠體色素,葉綠素a、葉綠素 和類胡蘿卜素最大吸收峰的波長分別是665nm、649nm和470nm。 根據分光光度計測定的吸光度值,可以計算出乙醇提取液中葉綠體色素含量。 實驗目的: 掌握分光光度法對葉綠素a、葉綠素b、葉綠素總濃度和類胡蘿卜素總濃度測定和計算的 方法。 實驗材料和方法植物材料:菠菜葉片、番茄幼苗葉片 實驗用具:分光光度計、天平、研缽、漏斗、剪刀、容量瓶、燒杯、濾紙、滴管等 實驗試劑:95%乙醇、石英砂和碳酸鈣 試驗方法:分光光度法 葉綠體色素的提取取新鮮菠菜葉片(或番茄幼苗葉片)0.5 克,擦干,去中脈,剪碎放入研缽;加入少許石英砂 和CaCO ,再加入95%乙醇3ml,研磨成勻漿,再加95%乙醇10ml,靜置10分鐘;用漏斗濾去殘 渣,用丙酮反復沖洗研缽、殘渣至無色;用容量瓶定容至50ml 2、吸光度的測定取光徑1cm 比色杯,注入上述葉綠素提取液,以95%乙醇注入另一同樣的比色杯內作為 空白對照,在波長665、649 和470nm 下測定吸光度。

乙醇含量_乙醇_乙醇與鈉反應

3、結果計算 依據下列丙酮提取液中色素濃度計算公式,分別計算出葉綠素a、b 的濃度及其葉綠素總 濃度和類胡蘿卜素的濃度。 附錄:722 分光光度計的使用 1、選擇靈敏度旋紐至3;將波長調節到600nm,打開樣品室蓋,打開電源開關預熱20min。 2、打開樣品室蓋,將測定旋紐調至T(透光度),用調節旋紐0 調0;蓋上樣品室蓋,用調 節旋紐100 調100。 3、將空白樣品放入樣品槽,按上述方法調0 和調100。 4、將測定旋紐調至A(吸光度),用Abs 旋紐調0,測定待測樣品的光密度。 計算公式: 95%乙醇提取液中色素濃度的計算 (葉綠素a)=13.95A665 6.8A649 (葉綠素b)=24.96A649 7.32A665 =18.16A649 6.63A665 x.c(類胡蘿卜素)=(1000A 470 )/248葉綠體色素含量= 實驗結果與討論1、菠菜葉片不同波長下的吸光度(0.42g) 波長(nm) 吸光度 平均值 665 0.702 0.683 0.755 0.7133 649 0.328 0.326 0.340 0.3313 470 0.823 0.827 0.861 0.8370 (葉綠素a)=13.95*0.7133–6.8*0.3313=7.6977mg/L (葉綠素b)=24.96*0.3313–7.32*0.7133=3.0479mg/L =18.16*0.3313+6.63*0.7133=10.7456mg/L x.c(類胡蘿卜素)=(1000A 470 樣品鮮重(或干重、面稀釋倍數 (葉綠素b)含量=3.0479mg/L*0.05L*1/0.42g=36.28mg/g x.c(類胡蘿卜素)含量=1.8995mg/L*0.05L*1/0.42g=22.61mg/g 2、1#番茄幼苗葉片不同波長下的吸光度(0.34g) 波長(nm) 吸光度 平均值 665 0.463 0.452 0.453 0.4560 649 0.203 0.264 0.275 0.2473 470 0.492 0.464 0.479 0.4783 (葉綠素a)=13.95*0.4560–6.8*0.2473=4.6796mg/L (葉綠素b)=24.96*0.2473–7.32*0.4560=2.8347mg/L =18.16*0.2473+6.63*0.4560=7.5142mg/L x.c(類胡蘿卜素)=(1000 x.c(類胡蘿卜素)含量=0.5778mg/L*0.05L*1/0.34g=8.50mg/g 3、4#番茄幼苗葉片不同波長下的吸光度(0.2g) 波長(nm) 吸光度 平均值 665 0.219 0.225 0.231 0.2250 649 0.113 0.117 0.124 0.1180 470 0.253 0.259 0.268 0.2600 (葉綠素a)=13.95*0.2250–6.8*0.1180=2.33636mg/L (葉綠素b)=24.96*0.1180–7.32*0.2250=1.29828mg/L =18.16*0.1180+6.63*0.2250=3.6353mg/L x.c(類胡蘿卜素)=(1000* (葉綠素b)含量=1.29828mg/L*0.05L*1/0.2g=32.457mg/g x.c(類胡蘿卜素)含量=0.43mg/L*0.05L*1/0.2g=10.75mg/g 討論: 葉綠素a、b 在藍色區也有吸收峰,能否用這一吸收峰波長進行葉綠素的定量分析?為 什么? 答:不能。定量分析的吸收峰必須要穩定,還要有強的吸收;另外乙醇含量,還需要考慮干擾 的問題。光合色素除了葉綠素外還有類胡蘿卜素,類胡蘿卜素主要吸收藍光乙醇含量,為了排 除干擾要選用紅光。 參考文獻: 王英典,劉

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標簽: 乙醇含量
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